缓冲盐使用不当对色谱柱的影响及其正确使用方法

 在液相色谱分析过程中，常常需要使用缓冲盐来调解流动相的pH值。缓冲盐的恰当选择能够改善分离效果和峰形。若是对缓冲盐选择和使用不当，对色谱柱可能造成一些影响。

        我们可以从柱压升高、柱效下降以及使化合物的保留时间发生变化等方面来分析原因：
       （1）柱压升高；
        原因：缓冲盐使用不当导致缓冲盐析出，会堵塞色谱柱两端的塞板和键合相颗粒之间的孔隙，阻碍流动相传质，从而引起柱压升高。
        （2）柱效下降；
        原因：a）有些缓冲盐会渗入到键合相的深处，损害硅胶基体，导致色谱柱键合相流失，柱床变松，柱效下降；b）凝结在键合相表面，使C18碳链难以舒展，对物质的保留能力下降，导致柱效下降。因此用过缓冲盐后需要对色谱柱进行冲洗，水中缓冲盐浓度较大时应特别引起注意。
        （3）相同化合物的保留时间发生变化；
        原因：如果没有冲洗干净就进行进样，色谱柱内含有的盐会使化合物的保留时间发生变化。
        在日常实验中，如何正确使用缓冲盐呢？使用缓冲盐时有哪些注意事项？
        （1）使用前的处理：
        在使用缓冲盐作流动相之前需要用不含缓冲盐的流动相冲洗色谱柱，直至基线平稳。原则上，用于冲洗的流动相与分析时所用的流动相含水的比例相同（或含水更多），不同的只是用于冲洗用的流动相中不含缓冲盐。理由：缓冲盐通常易溶于水，难溶于有机溶剂。用含缓冲盐的（特别是做流动相的水为饱和的缓冲盐溶液时-鲁南瑞虹）流动相进行分析时，如果分析前色谱柱中用于保存色谱柱的流动相中含水的比例相对较小，不先冲洗掉，接下来做样品的时候所用的流动相中如果有机溶剂含量大，而其比例中所含的水又不足以溶解该缓冲盐时，缓冲盐将会在色谱柱柱体上析出，沉积下来，这将可能导致上述对色谱柱的损害。
        （2） 使用后的处理：
        用与分析时含水比例相同的流动相（与分析用流动相唯一的区别是，用于冲洗的流动相不含缓冲盐）进行冲洗约30min，直至基线平稳。如果该色谱柱在接下来很长的一段时间内不使用，要长期保存，则需再加上一步，即用纯的有机溶剂冲洗一遍，直至基线平稳。
        注意：用过缓冲盐的柱子，先用水冲再用有机溶剂冲比较好，水冲应最少要40min，否则连续使用柱压必定会升高。